La mayoría de los componentes celulares son incoloros y no se pueden distinguir claramente al microscopio. La premisa básica de la microscopía de fluorescencia es la tinción de componentes con tintes.
Los tintes fluorescentes, también conocidos como fluoróforos o tintes fluorescentes, son moléculas que absorben la luz de excitación de una longitud de onda determinada (generalmente UV) y emiten luz de una longitud de onda más larga después de un breve retraso. El retraso entre la absorción y la emisión es insignificante, normalmente del orden de nanosegundos.
Luego, la luz emitida se puede filtrar de la luz de excitación para revelar la ubicación del fluoróforo.
La microscopía de fluorescencia utiliza una luz más intensa para iluminar la muestra. Esta luz excita el material fluorescente de la muestra, que luego emite luz en una longitud de onda más larga.
La imagen resultante se basa en la longitud de onda de emisión de una segunda fuente de luz o sustancia fluorescente distinta de la luz utilizada originalmente para iluminar y excitar la muestra.
Procesando
La luz en la longitud de onda de excitación se enfoca en la muestra a través de la lente objetivo. La fluorescencia emitida por la muestra se enfoca en el detector a través de la lente objetivo. Dado que la mayor parte de la luz de excitación se transmite a través de la muestra, sólo la luz de excitación reflejada llega al objetivo junto con la luz emitida.
forma
"Microscopía de fluorescencia" se refiere a cualquier microscopio que utiliza fluorescencia para generar imágenes, ya sea un dispositivo más simple como un microscopio de epifluorescencia o un diseño más complejo como un microscopio confocal, que utiliza seccionamiento óptico para obtener una mejor resolución. Imagen de fluorescencia.
La mayoría de los microscopios de fluorescencia utilizados son microscopios de epifluorescencia, donde la excitación de los fluoróforos y la detección de la fluorescencia se logran a través del mismo camino óptico (es decir, a través de la lente objetivo).
